Plasmide CRISPR d'Activation (m) IL-6: sc-421114-ACT

Le gène murin *Il6* code l’interleukine-6 (IL-6), une cytokine pléiotrope qui coordonne les réponses immunitaires innée et adaptative en régulant la signalisation de la phase aiguë, le recrutement des leucocytes, ainsi que la différenciation des lymphocytes B et T. L’IL-6 transmet son signal via IL-6R et gp130 afin d’activer les voies JAK/STAT3, MAPK/ERK et PI3K/AKT, remodelant les programmes transcriptionnels inflammatoires et le métabolisme cellulaire. La dérégulation de l’expression d’IL-6 est largement étudiée dans l’inflammation chronique, l’auto-immunité, les réponses aux infections et le dialogue entre tumeur et microenvironnement immunitaire, où une activité soutenue de STAT3 peut modifier la polarisation myéloïde et le remodelage tissulaire. En tant que nœud central des réseaux de cytokines, l’IL-6 est fréquemment examinée pour ses effets sur la signalisation paracrine, la fonction de barrière et l’expression de gènes sensibles au stress.

IL-6 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Il6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-6 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Il6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Il6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Il6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de Il6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.