Plasmide CRISPR d'Activation (m) IL-34: sc-429354-ACT

Le gène murin *Il34* code l’interleukine-34 (IL-34), une cytokine qui transmet principalement ses signaux via CSF1R afin de réguler la survie, la prolifération et la différenciation des phagocytes mononucléés. L’IL-34 influence l’homéostasie des macrophages et des microglies et façonne les environnements immunitaires tissulaires en modulant les programmes de la lignée myéloïde et les réponses inflammatoires. Par l’intermédiaire de cascades de signalisation associées à CSF1R, notamment les voies MAPK et PI3K/AKT, l’IL-34 peut affecter la présentation d’antigènes, les réseaux de cytokines et la fonction phagocytaire. Une activité dérégulée de l’IL-34 a été associée à l’inflammation d’origine immunitaire et à des processus neuro-immuns, faisant d’*Il34* un nœud pertinent pour étudier la biologie des macrophages/microglies dans des modèles pertinents pour les maladies.

IL-34 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Il34 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-34 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Il34 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Il34, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-34. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Il34 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-34 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-34 dans les cellules tumorales présentant une expression de Il34 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.