IL-23 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401374-ACT

IL23A kodiert die p19‑Untereinheit von Interleukin‑23 (IL‑23), einem heterodimeren Zytokin, das über den IL‑23‑Rezeptorkomplex signalisiert, JAK/STAT‑Signalwege – insbesondere STAT3 – aktiviert und entzündliche Genexpressionsprogramme verstärkt. IL‑23 fördert die Expansion und Stabilisierung von Th17‑Antworten und unterstützt die Bildung von Effektormediatoren wie IL‑17 und IL‑22, wodurch angeborene Erkennungsvorgänge mit der adaptiven Immunität an Barrieregeweben verknüpft werden. Eine fehlregulierte IL23A/IL‑23‑Signalgebung ist an chronischer Immunaktivierung und entzündlicher Pathologie beteiligt und ist für die Biologie autoimmuner und entzündlicher Erkrankungen von hoher Relevanz. In vitro dient IL23A als zentraler Knotenpunkt zur Untersuchung des zytokinvermittelten Crosstalks zwischen myeloiden Zellen, T‑Zellen und epithelialen Kompartimenten.

IL-23 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IL23A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-23 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IL23A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IL23A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-23-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IL23A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-23-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-23-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IL23A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.