Plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-20Rα (h): sc-405034

Présentation

IL20RA code la sous-unité alpha du récepteur de l’interleukine‑20 (IL‑20Rα), une sous-unité de récepteur de cytokines de type I qui s’hétérodimérise avec IL20RB pour former des récepteurs fonctionnels de l’IL‑19, de l’IL‑20 et de l’IL‑24. La liaison du ligand active la signalisation JAK/STAT, avec une phosphorylation marquée de STAT3 et de STAT1, reliant les cytokines de la famille IL‑20 à des programmes épithéliaux et kératinocytaires qui régulent la fonction de barrière, les réponses antimicrobiennes et le remodelage tissulaire. La signalisation médiée par IL‑20Rα interagit avec des réseaux inflammatoires qui modulent l’expression de cytokines et de chimiokines et peut influencer les états de prolifération et de différenciation dans les types cellulaires répondeurs. Une dérégulation des voies de la famille IL‑20 a été associée à des phénotypes cutanés inflammatoires et à des processus plus larges médiés par le système immunitaire, faisant d’IL20RA un nœud utile pour des études mécanistiques de la biologie épithéliale pilotée par les cytokines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-20Rα (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IL20RA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IL20RA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IL20RA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IL-20Rα.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IL20RA pour l'étude de la signalisation de IL-20Rα, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IL20RA essentiels à la fonction de IL-20Rα
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IL20RA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IL-20Rα plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IL-20Rα plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IL20RA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IL-20Rα plasmide HDR (h) et le IL-20Rα (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IL20RA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IL20RA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.