Plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-1RII (m): sc-421099

Présentation

Il1r2 code l’interleukine-1 récepteur de type II murin (IL‑1RII), un membre atypique de la famille des récepteurs de l’IL‑1 qui agit principalement comme récepteur leurre pour l’IL‑1α et l’IL‑1β. En se liant aux ligands de l’IL‑1 sans déclencher de signalisation productive, l’IL‑1RII limite la disponibilité des ligands pour l’IL‑1R1 et atténue les cascades inflammatoires en aval qui, autrement, mobilisent des programmes transcriptionnels dépendants de NF‑κB et des MAPK. L’activité d’IL‑1RII contribue à ajuster l’activation de l’immunité innée, le recrutement des leucocytes et l’amplification du réseau de cytokines dans les compartiments myéloïdes et stromaux. Des modifications de l’expression d’IL‑1RII ou de son relargage (shedding) ont été associées à des réponses inflammatoires dérégulées, pertinentes pour l’inflammation auto-immune, la biologie des infections et des modèles de lésions tissulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-1RII (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Il1r2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Il1r2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Il1r2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IL-1RII.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Il1r2 pour l'étude de la signalisation de IL-1RII, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Il1r2 essentiels à la fonction de IL-1RII
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Il1r2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IL-1RII plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IL-1RII plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Il1r2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IL-1RII plasmide HDR (m) et le IL-1RII (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Il1r2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Il1r2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.