IL-1ra Plasmide Double Nickase (h): sc-401313-NIC

IL1RN codifica l’antagonista del recettore dell’interleuchina-1 (IL-1ra), una citochina secreta che inibisce in modo competitivo il legame di IL-1α e IL-1β al recettore dell’IL-1 di tipo I, limitando così la segnalazione a valle dipendente da MyD88. Attenuando l’attivazione delle vie NF-κB e MAPK, IL-1ra modula i programmi trascrizionali che controllano la produzione di citochine, il reclutamento dei leucociti e le risposte infiammatorie di fase acuta. Un’espressione o una funzione disregolata di IL1RN è associata a un aumento della segnalazione infiammatoria ed è stata collegata a fenotipi autoinfiammatori e autoimmuni, sottolineandone l’importanza per l’omeostasi immunitaria. Nei sistemi cellulari, IL1RN rappresenta un nodo sperimentalmente gestibile per indagare il crosstalk guidato da IL-1 con l’attività dell’inflammasoma e, più in generale, la regolazione delle reti di citochine.

IL-1ra Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IL1RN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IL1RN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IL1RN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IL1RN interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.