Plásmido CRISPR de Activación (h) IL-17RB: sc-404114-ACT

IL17RB codifica el receptor B de la interleucina 17 (IL-17RB), un receptor de citocinas transmembrana de tipo I que se asocia con IL17RA para transducir señales de ligandos de la familia IL-17, de manera más destacada IL-25 (IL-17E). La unión del receptor recluta proteínas adaptadoras como ACT1 para activar programas de señalización de NF-κB y MAPK, conectando la detección por parte de células epiteliales y estromales con la producción de quimiocinas, la inflamación mucosa y la polarización de la respuesta inmunitaria de tipo 2. La actividad de IL-17RB influye en la comunicación cruzada entre tejidos de la vía aérea y otras barreras, células mieloides y subpoblaciones linfoides, moldeando las respuestas frente a alérgenos y helmintos, así como una remodelación inflamatoria más amplia. La expresión o la señalización desregulada de IL17RB se ha asociado con estados inflamatorios crónicos y con cambios en el microambiente inmunitario asociado a tumores, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de señalización inmunitaria y comunicación célula–célula.

IL-17RB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IL17RB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IL-17RB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IL17RB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IL17RB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IL-17RB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IL17RB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IL-17RB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IL-17RB en células tumorales con expresión de IL17RB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.