Particules Lentivirales d'Activation (h2) IL-13Rα2: sc-402525-LAC-2

Chez l’humain, IL13RA2 code le récepteur alpha 2 de l’interleukine‑13 (IL‑13Rα2), un récepteur à forte affinité pour l’IL‑13 qui module la signalisation des cytokines de type 2 et peut agir comme un récepteur leurre régulateur, influençant la disponibilité de l’IL‑13 ainsi que les programmes transcriptionnels en aval dépendants de STAT6. L’expression d’IL‑13Rα2 est associée à des processus tels que les interactions épithélio‑mésenchymateuses, le remodelage de la matrice extracellulaire et les réponses inflammatoires, avec un dialogue croisé avec des voies qui régissent la migration cellulaire et la fibrose tissulaire. Une dérégulation d’IL13RA2 est fréquemment liée à la biologie tumorale et aux phénotypes du microenvironnement immunitaire, et a été étudiée dans des cancers tels que le glioblastome, ainsi que dans des contextes de fibrose et d’inflammation allergique. L’édition génique d’IL13RA2 permet d’étayer des études mécanistiques sur la dynamique de la signalisation de l’IL‑13, les interactions récepteur‑ligand et des criblages de génomique fonctionnelle évaluant des phénotypes induits par les cytokines dans des modèles cellulaires humains pertinents.

Les particules d'activation lentivirales IL-13Rα2 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de IL13RA2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales IL-13Rα2 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription IL13RA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de IL-13Rα2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif IL13RA2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.