Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-11Rα: sc-402503-ACT

IL11RA code pour le récepteur humain de l’interleukine-11 alpha (IL-11Rα), la sous-unité de liaison au ligand qui s’associe au co-récepteur gp130 pour initier la signalisation en réponse à l’IL-11. La liaison au récepteur active la voie JAK/STAT, avec des contributions supplémentaires des voies MAPK/ERK et PI3K/AKT, orientant des programmes transcriptionnels qui régulent la survie, la prolifération et la différenciation cellulaires dans de multiples contextes stromaux et épithéliaux. La signalisation dépendante d’IL-11Rα est fréquemment étudiée dans les processus fibro-inflammatoires, le remodelage de la matrice extracellulaire et l’homéostasie tissulaire, et une activité altérée de cette voie a été associée à la biologie de maladies liées à la fibrose et à l’inflammation. En tant que récepteur de surface dont le contrôle amont par le ligand et les sorties transcriptionnelles en aval sont bien définis, IL11RA constitue un nœud utile pour analyser la dynamique de la signalisation des cytokines et les interactions entre voies (« cross-talk ») dans des modèles de cellules humaines.

IL-11Rα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL11RA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-11Rα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL11RA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL11RA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-11Rα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL11RA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-11Rα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-11Rα dans les cellules tumorales présentant une expression de IL11RA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.