Plásmido CRISPR de Activación (m) IKK alpha: sc-419658-ACT
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (m) IKK alpha es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (m) IKK alpha incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR IKK alpha (m) y el plásmido de activación CRISPR IKK alpha (m2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de Chuk. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IKK alpha Anticuerpo (B-8): sc-7606
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (m) IKK alpha | sc-419658-ACT | 20 µg | $397.00 |
El gen murino **Chuk** codifica **IKK alfa (IKKα)**, una subunidad catalítica del complejo quinasa de IκB que acopla señales ascendentes provenientes del receptor de TNF, el receptor de IL‑1, los receptores tipo Toll y los receptores de antígeno con la activación de la vía de **NF‑κB**. Más allá de la señalización canónica de NF‑κB mediante la fosforilación de IκB, IKKα es un regulador clave de la cascada no canónica de NF‑κB al promover el procesamiento de p100 a p52, influyendo en la organogénesis linfoide, la maduración de las células B y los programas génicos inflamatorios. IKKα también se conecta con vías asociadas a MAPK y al ciclo celular para modular la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. La actividad desregulada de CHUK/IKKα se asocia con señalización inflamatoria aberrante y con alteraciones de la homeostasis epitelial e inmunitaria, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de programas transcripcionales mediados por el sistema inmune y asociados a tumores.
IKK alpha El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Chuk sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
IKK alpha El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Chuk en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Chuk, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IKK alpha. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Chuk y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IKK alpha en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IKK alpha en células tumorales con expresión de Chuk silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.