Plasmide CRISPR/Cas9 KO IGFBP6 (m): sc-421067

Présentation

Igfbp6 code la protéine 6 de liaison aux facteurs de croissance de type insuline (insulin-like growth factor binding protein 6, IGFBP6), un régulateur sécrété de la signalisation des facteurs de croissance de type insuline, doté d’une forte affinité pour l’IGF‑II, qui module la biodisponibilité du ligand et l’activation des récepteurs. En séquestrant l’IGF‑II et en influençant sa distribution dans l’espace extracellulaire, IGFBP6 peut façonner l’activité des voies PI3K–AKT et MAPK, affectant ainsi la prolifération, la différenciation, la survie et l’adaptation métabolique. Dans les tissus murins, l’expression d’Igfbp6 contribue aux programmes de développement et d’homéostasie tissulaire, et l’altération de l’activité d’IGFBP6 a été étudiée dans des contextes où une dérégulation de l’axe IGF est impliquée, notamment en biologie du cancer et dans des phénotypes cardiométaboliques. Sa localisation extracellulaire la rend également pertinente pour l’étude de la communication paracrine et du contrôle microenvironnemental de la signalisation des facteurs de croissance.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IGFBP6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Igfbp6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Igfbp6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Igfbp6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IGFBP6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Igfbp6 pour l'étude de la signalisation de IGFBP6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Igfbp6 essentiels à la fonction de IGFBP6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Igfbp6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IGFBP6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IGFBP6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Igfbp6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IGFBP6 plasmide HDR (m) et le IGFBP6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Igfbp6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Igfbp6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.