Partículas Lentivirales de Activación (h) IGFBP5: sc-400945-LAC

IGFBP5 (proteína 5 de unión al factor de crecimiento similar a la insulina) es un regulador secretado y asociado a la matriz extracelular de la señalización de IGF que modula la biodisponibilidad y la interacción con el receptor de IGF-I e IGF-II. Al dar forma a la salida de las vías PI3K–AKT y MAPK/ERK impulsadas por IGF1R, IGFBP5 influye en la proliferación, la supervivencia, la migración y la diferenciación celulares, con efectos adicionales independientes de IGF sobre la adhesión celular y la remodelación de la matriz. En tejidos humanos, IGFBP5 se asocia con la biología mesenquimal y de fibroblastos, programas osteogénicos y estados transcripcionales ligados a la reparación de heridas, a menudo en intersección con la señalización de TGF-β/SMAD y la organización de la MEC. Se ha descrito una expresión desregulada de IGFBP5 en diversos microambientes fibróticos y asociados a tumores, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la respuesta a factores de crecimiento dependiente del contexto y la remodelación del estroma.

Las partículas de activación lentiviral IGFBP5 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de IGFBP5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral IGFBP5 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción IGFBP5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de IGFBP5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo IGFBP5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.