Plasmide CRISPR d'Activation (h) IGFBP5: sc-400945-ACT

IGFBP5 (insulin-like growth factor binding protein 5) est une protéine sécrétée de liaison aux IGF qui module la biodisponibilité d’IGF1/IGF2 et la signalisation via l’axe IGF, influençant l’activité des voies PI3K–AKT et MAPK. En régulant la réponse aux facteurs de croissance et les interactions avec la matrice extracellulaire, IGFBP5 contribue au contrôle de la prolifération, de la survie, de la différenciation et de la migration cellulaires, ainsi qu’au remodelage tissulaire. Une expression altérée d’IGFBP5 a été associée à des modifications des programmes liés à la fibrose, à la biologie du stroma et à la dynamique du microenvironnement tumoral, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier la régulation de la croissance de manière dépendante du contexte. En tant que protéine humaine dotée de fonctions à la fois dépendantes et indépendantes des IGF, IGFBP5 est fréquemment étudiée dans les voies qui gouvernent la sénescence cellulaire et les réponses développementales ou aux lésions.

IGFBP5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IGFBP5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IGFBP5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IGFBP5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IGFBP5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IGFBP5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IGFBP5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IGFBP5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IGFBP5 dans les cellules tumorales présentant une expression de IGFBP5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.