Partículas Lentivirales de Activación (h) IGF2BP3: sc-402603-LAC

IGF2BP3 (proteína 3 de unión al ARNm del factor de crecimiento similar a la insulina 2) es una proteína oncofetal de unión al ARN que regula la expresión génica postranscripcional al unirse y estabilizar ARNm diana, y al modular su localización y traducción. Participa en la dinámica de los gránulos de ARN e influye en vías que gobiernan la progresión del ciclo celular, la migración y las respuestas al estrés, en parte mediante el control de transcritos implicados en las salidas de señalización de PI3K–AKT y MAPK. La expresión de IGF2BP3 es baja en la mayoría de los tejidos adultos, pero con frecuencia está aumentada en múltiples tipos de tumores, donde se asocia con fenotipos agresivos y programas de diferenciación alterados. Como resultado, IGF2BP3 se estudia ampliamente como un nodo mecanístico que vincula la determinación del destino del ARNm con estados celulares proliferativos e invasivos.

Las partículas de activación lentiviral IGF2BP3 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de IGF2BP3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral IGF2BP3 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción IGF2BP3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de IGF2BP3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo IGF2BP3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.