Plásmido Doble Nickase (h) IGF2BP3: sc-402603-NIC

IGF2BP3 (IMP3) es una proteína conservada de unión a ARN que reconoce transcritos modificados con m6A y regula la localización, la estabilidad y la traducción del ARNm durante el desarrollo y las transiciones de estado celular. Modula programas de control génico postranscripcional vinculados a la proliferación, la migración y las respuestas al estrés, influyendo en vías como PI3K–AKT y MAPK mediante la estabilización de ARNm asociados al crecimiento y la supervivencia. IGF2BP3 se reexpresa con frecuencia en contextos malignos y se utiliza como marcador de biología tumoral agresiva, donde puede favorecer la transición epitelio-mesenquimal y una reprogramación del metabolismo. Estas propiedades convierten a IGF2BP3 en un blanco habitual para estudiar regulones oncogénicos de ARN, mecanismos de lectura de m6A y el control dependiente del contexto de la expresión génica.

IGF2BP3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IGF2BP3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IGF2BP3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IGF2BP3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IGF2BP3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.