Plásmido CRISPR de Activación (h) IGF2BP3: sc-402603-ACT

IGF2BP3 (proteína 3 de unión al ARNm del factor de crecimiento similar a la insulina 2) es una proteína oncofetal de unión a ARN que regula la expresión génica posranscripcional al controlar la estabilidad, la localización y la traducción del ARNm. Al unirse a transcritos diana y participar en gránulos ribonucleoproteicos, IGF2BP3 influye en programas proliferativos y migratorios, en la progresión del ciclo celular y en la traducción adaptativa al estrés, con vínculos con las salidas de la señalización de IGF y con redes más amplias sensibles a factores de crecimiento. También se relaciona con la regulación epitranscriptómica al reconocer ARN marcados con m6A para modular el destino de los transcritos de manera dependiente del contexto. La expresión aberrante de IGF2BP3 se asocia con frecuencia a fenotipos tumorigénicos y se estudia como determinante de la invasión, la metástasis y los mecanismos de resistencia a terapias en modelos de biología del cáncer.

IGF2BP3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IGF2BP3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IGF2BP3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IGF2BP3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IGF2BP3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IGF2BP3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IGF2BP3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IGF2BP3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IGF2BP3 en células tumorales con expresión de IGF2BP3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.