Ig J Chain CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403642-ACT

ヒトのJCHAINは、免疫グロブリンJ鎖（Ig Jチェーン）をコードしており、IgAおよびIgMの重合、ならびに二量体IgAと五量体IgMの形成に必要な、分泌型の小さなポリペプチドです。Ig Jチェーンは多量体抗体の組み立てと安定性を支え、ポリマー型免疫グロブリン受容体（PIGR）との相互作用を可能にすることで、分泌型免疫グロブリンの上皮横断輸送を促進し、粘膜免疫防御に寄与します。その発現は、B細胞が抗体分泌性の形質細胞へ分化する過程と密接に結びついており、高い免疫グロブリン産生に対応するための小胞体ストレス応答（unfolded protein response）や分泌経路のプログラムと協調して制御されています。JCHAIN発現の制御異常は、形質細胞状態のマーカーとして用いられ、免疫不全、慢性炎症、B細胞／形質細胞系腫瘍などの文脈で研究されています。

Ig J Chain CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性JCHAINの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ig J Chain CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における JCHAIN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はJCHAIN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ig J Chainの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のJCHAIN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIg J Chain依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびJCHAIN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIg J Chain経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。