Plásmido CRISPR de Activación (h) Ig J Chain: sc-403642-ACT

El JCHAIN humano codifica la cadena J de las inmunoglobulinas, un pequeño polipéptido secretado necesario para la polimerización de IgA e IgM y para la formación de IgA dimérica e IgM pentamérica. La cadena J de Ig favorece el ensamblaje y la estabilidad de los anticuerpos multiméricos y permite la interacción con el receptor de inmunoglobulina polimérica (PIGR), lo que promueve el transporte transepitelial de inmunoglobulinas secretoras y la defensa inmunitaria de las mucosas. Su expresión está estrechamente ligada a la diferenciación de las células B en células plasmáticas secretoras de anticuerpos y se coordina con la respuesta a proteínas mal plegadas y con los programas de la vía secretora que permiten una alta producción de inmunoglobulinas. La expresión desregulada de JCHAIN se utiliza como marcador de estados de células plasmáticas y se estudia en contextos como la inmunodeficiencia, la inflamación crónica y las neoplasias de células B/células plasmáticas.

Ig J Chain El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de JCHAIN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ig J Chain El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus JCHAIN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional JCHAIN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ig J Chain. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo JCHAIN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ig J Chain en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ig J Chain en células tumorales con expresión de JCHAIN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.