Plasmide Double Nickase (h) IFN-α/βRβ: sc-403854-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) IFN-α/βRβ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide IFN-α/βRβ Double Nickase (h) et le plasmide IFN-α/βRβ Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant IFNAR2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IFN-α/βRβ Antibody (G-4): sc-376273
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) IFN-α/βRβ | sc-403854-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) IFN-α/βRβ | sc-403854-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IFNAR2 code le récepteur bêta de l’interféron alpha/bêta, une sous-unité essentielle du complexe récepteur des interférons de type I qui coopère avec IFNAR1 pour reconnaître l’IFN-α/β et initier une signalisation antivirale et immunomodulatrice. La liaison du ligand active JAK1 et TYK2, entraînant la phosphorylation de STAT1/STAT2 et la formation du complexe ISGF3, qui induit l’expression des gènes stimulés par l’interféron, avec un dialogue croisé avec les voies MAPK et PI3K. Par ces cascades, IFNAR2 contribue à réguler la détection immunitaire innée, la présentation de l’antigène, le contrôle du cycle cellulaire et l’apoptose dans divers types cellulaires. Une signalisation IFNAR2 dérégulée a été impliquée dans des réponses antivirales altérées, l’inflammation chronique et des pathologies à médiation immunitaire, ce qui en fait une cible fréquemment étudiée en biologie des interférons et dans les interactions hôte–pathogène.
IFN-α/βRβ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IFNAR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IFNAR2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IFNAR2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IFNAR2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.