Plasmide Double Nickase (m) IFN-α/βRα: sc-421047-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) IFN-α/βRα correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide IFN-α/βRα Double Nickase (m) et le plasmide IFN-α/βRα Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ifnar1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IFN-α/βRα Antibody (E-12): sc-393089
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) IFN-α/βRα | sc-421047-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) IFN-α/βRα | sc-421047-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin Ifnar1 code la sous-unité alpha du récepteur de l’interféron alpha/bêta (IFN-α/βRα), un composant essentiel du complexe récepteur des interférons de type I qui déclenche des signalisations antivirales et immunomodulatrices lors de la liaison d’IFN-α/β. L’engagement du récepteur active JAK1 et TYK2, entraînant la phosphorylation de STAT1/STAT2, l’assemblage d’ISGF3 avec IRF9 et la transcription de gènes stimulés par l’interféron, qui régulent l’activation de l’immunité innée, la présentation de l’antigène et la survie cellulaire. La signalisation via IFNAR1 interagit également avec les voies NF-κB et MAPK afin de moduler les réponses inflammatoires et le dialogue avec les réponses des récepteurs de reconnaissance des motifs. Les programmes dépendants d’IFNAR1, lorsqu’ils sont dérégulés, sont fréquemment étudiés dans des contextes de susceptibilité virale, d’inflammation chronique et de dérégulation immunitaire associée à l’auto-immunité, ainsi que dans les interactions tumeur–système immunitaire.
IFN-α/βRα Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ifnar1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ifnar1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ifnar1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ifnar1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.