Plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-α4 (m): sc-421041

Présentation

Ifna4 code l’interféron-α4 (IFN-α4), un interféron de type I produit en réponse aux acides nucléiques viraux et à d’autres signaux déclencheurs de l’immunité innée. IFN-α4 se lie au complexe récepteur IFNAR pour activer la phosphorylation de STAT1/STAT2 dépendante de JAK1/TYK2 et la formation du complexe transcriptionnel ISGF3, induisant des gènes stimulés par l’interféron qui limitent la réplication des agents pathogènes et modulent la présentation de l’antigène. Cette signalisation façonne les interactions avec les voies NF-κB et IRF, influençant les programmes géniques inflammatoires, l’activation myéloïde et l’amorçage de l’immunité adaptative. Une activité de l’interféron de type I dérégulée est pertinente pour la recherche sur l’inflammation chronique et l’auto-immunité, ainsi que pour les modèles d’interactions hôte–pathogène où le niveau de base de l’interféron influe sur la susceptibilité à la maladie et la pathologie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-α4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ifna4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ifna4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ifna4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IFN-α4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ifna4 pour l'étude de la signalisation de IFN-α4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ifna4 essentiels à la fonction de IFN-α4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ifna4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IFN-α4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IFN-α4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ifna4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IFN-α4 plasmide HDR (m) et le IFN-α4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ifna4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ifna4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.