Plasmide CRISPR d'Activation (h) IFITM3: sc-403281-ACT

La protéine transmembranaire 3 induite par l’interféron (IFITM3) est le produit d’un gène stimulé par l’interféron, localisé principalement aux membranes endosomales et lysosomales, où elle limite l’entrée d’un large éventail de virus enveloppés. En modifiant les propriétés membranaires et le trafic intracellulaire, IFITM3 module l’endocytose et les événements de fusion en aval de la signalisation immunitaire innée, notamment les voies des interférons de type I et III. Des variations de l’expression ou de la fonction d’IFITM3 ont été associées à des différences de susceptibilité et de sévérité des infections respiratoires virales, ce qui en fait une cible fréquemment étudiée reliant les réponses à l’interféron au contrôle de l’entrée dans les cellules hôtes. IFITM3 est également étudiée dans le contexte de la signalisation inflammatoire et des réponses au stress cellulaire, qui remodèlent la dynamique membranaire et le transport vésiculaire.

IFITM3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IFITM3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IFITM3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IFITM3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IFITM3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IFITM3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IFITM3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IFITM3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IFITM3 dans les cellules tumorales présentant une expression de IFITM3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.