IFITM2 Double Nickase Plasmid (h): sc-403889-NIC

IFITM2 (interferoninduziertes Transmembranprotein 2) ist ein Typ‑II-Transmembranprotein, das durch Typ‑I- und Typ‑II-Interferon-Signalgebung induziert wird und als intrinsischer Restriktionsfaktor wirkt, der den Eintritt und frühe Replikationsschritte verschiedener behüllter Viren begrenzt. Es lokalisiert vor allem in endosomalen und Plasmamembran-Kompartimenten, wo es Membraneigenschaften und den Membrantransport so verändert, dass virale Fusion und Aufnahme behindert werden; damit ist es mit der angeborenen Immunabwehr und Netzwerken interferon-stimulierter Gene verknüpft. Die IFITM2-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die Endozytose, Vesikelorganisation und inflammatorische Signalgebung steuern, und seine Expression wird häufig als Readout für die Aktivierung des Interferon-Signalwegs verwendet. Eine dysregulierte IFITM2-Expression wurde im Kontext fehlgeleiteter Immunaktivierung und infektionsassoziierter Entzündungszustände untersucht, was ihre Relevanz für mechanistische Studien zu Wirt–Pathogen-Interaktionen unterstreicht.

IFITM2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IFITM2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IFITM2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IFITM2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IFITM2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.