Plásmido CRISPR de Activación (h) IFITM1: sc-416878-ACT

La proteína transmembrana inducida por interferón 1 (IFITM1) es un pequeño gen estimulado por interferón asociado a membrana que modula la señalización inmunitaria innata y restringe la entrada y la replicación de diversos virus envueltos al alterar las propiedades de la membrana y el tráfico endosomal. Su expresión se induce aguas abajo de las vías de interferón tipo I/II mediante la señalización JAK–STAT y contribuye a los programas celulares de estado antiviral y a las interacciones inmunoepiteliales. IFITM1 también participa en procesos vinculados a la adhesión celular, la proliferación y las respuestas al estrés, conectando la señalización por interferón con redes más amplias de remodelación transcripcional y de membrana. Se ha informado de una expresión desregulada de IFITM1 en contextos inflamatorios y en múltiples tipos de cáncer, lo que la convierte en un marcador útil y en un nodo funcional para estudios de interacciones hospedador–patógeno y de respuestas al interferón asociadas a tumores.

IFITM1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IFITM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IFITM1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IFITM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IFITM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IFITM1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IFITM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IFITM1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IFITM1 en células tumorales con expresión de IFITM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.