IFIT2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403830-ACT

Das interferoninduzierte Protein mit Tetratricopeptid-Wiederholungen 2 (IFIT2) ist das Produkt eines durch Interferon stimulierten Gens, das virale und zelluläre RNAs bindet und die Translation sowie die angeborene Immun-Signalübertragung moduliert. IFIT2 ist an antiviralen Programmen beteiligt, die durch Typ‑I‑Interferon und den JAK–STAT‑Signalweg gesteuert werden, und beeinflusst dabei den RNA‑Stoffwechsel, Stressantworten und apoptotische Signalwege während entzündlicher Stimulation. Eine dysregulierte IFIT2-Expression wurde in verschiedenen infektions- und entzündungsassoziierten Kontexten beobachtet und mit veränderten Interferon-Signaturen in der Biologie autoimmuner Erkrankungen sowie in Tumormikroumgebungen in Verbindung gebracht. Als Knotenpunkt in interferonregulierten Netzwerken wird IFIT2 häufig als Ausleseparameter für die Aktivierung der angeborenen Immunität verwendet und als mechanistischer Ansatzpunkt, um Wirt–Pathogen-Interaktionen und zytokingetriebene transkriptionelle Zustände zu untersuchen.

IFIT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IFIT2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IFIT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IFIT2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IFIT2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IFIT2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IFIT2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IFIT2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IFIT2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IFIT2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.