Plásmido CRISPR de Activación (h) IFI-44L: sc-406752-ACT

IFI44L (proteína 44 inducida por interferón, similar) codifica IFI-44L, un producto génico estimulado por interferón que se induce rápidamente aguas abajo del interferón tipo I y de la señalización JAK/STAT durante las respuestas antivirales innatas. La expresión de IFI-44L se utiliza habitualmente como una lectura molecular de la activación de la vía del interferón y se asocia con programas transcripcionales que configuran las respuestas celulares a la infección viral y a señales inflamatorias. Se ha descrito una desregulación de la expresión de IFI44L y de la metilación de su promotor en diversas afecciones asociadas al interferón, incluidas firmas de enfermedades autoinmunes sistémicas y estados de activación inmunitaria relacionados con infecciones. Estas propiedades hacen de IFI44L un objetivo útil para estudiar redes génicas impulsadas por interferón, la activación de células inmunitarias y la biología de la respuesta huésped–patógeno.

IFI-44L El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IFI44L sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IFI-44L El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IFI44L en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IFI44L, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IFI-44L. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IFI44L y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IFI-44L en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IFI-44L en células tumorales con expresión de IFI44L silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.