IFI-44 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405329-ACT

Humanes IFI44 (interferoninduziertes Protein 44; IFI-44) ist ein interferon-stimuliertes Gen, das nachgeschaltet der Signalübertragung von Typ-I- und Typ-III-Interferonen induziert wird und Eingänge aus Mustererkennungsrezeptor-(PRR)-Signalwegen wie RIG-I-ähnlichen Rezeptoren und cGAS–STING integriert. Die IFI-44-Expression wird häufig als Readout für JAK–STAT-getriebene antivirale Transkriptionsprogramme und eine breitere Aktivierung der angeborenen Immunantwort verwendet. Dysregulierte IFI44-Spiegel wurden in verschiedenen entzündlichen und autoimmunen Kontexten sowie in infektionsassoziierten Transkriptionssignaturen beschrieben, was IFI44 mit krankheitsrelevanter Interferon-Biologie in Verbindung bringt. In Forschungskontexten dient IFI44 als molekularer Ansatzpunkt, um die Stärke der Interferonantwort, die Konnektivität angeborener Immunnetzwerke und die Regulation stressresponsiver Gene zu untersuchen.

IFI-44 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IFI44-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IFI-44 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IFI44-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IFI44-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IFI-44-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IFI44-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IFI-44-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IFI-44-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IFI44-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.