Plásmido CRISPR de Activación (h) IFI-44: sc-405329-ACT

La IFI44 humana (proteína 44 inducida por interferón; IFI-44) es un gen estimulado por interferón que se induce aguas abajo de la señalización por interferones de tipo I y tipo III, integrando señales de vías de receptores de reconocimiento de patrones como los receptores tipo RIG-I y cGAS–STING. La expresión de IFI-44 se utiliza habitualmente como lectura de programas transcripcionales antivirales impulsados por JAK–STAT y de una activación más amplia de la inmunidad innata. Se han descrito niveles desregulados de IFI44 en contextos inflamatorios y autoinmunes y en firmas transcripcionales asociadas a infecciones, lo que la vincula con una biología del interferón relevante para la enfermedad. En el ámbito de la investigación, IFI44 sirve como una herramienta molecular para examinar la magnitud de la respuesta al interferón, la conectividad de la red de inmunidad innata y la regulación génica sensible al estrés.

IFI-44 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IFI44 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IFI-44 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IFI44 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IFI44, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IFI-44. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IFI44 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IFI-44 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IFI-44 en células tumorales con expresión de IFI44 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.