Particules Lentivirales d'Activation (h) IFI-27: sc-416981-LAC

IFI27 code pour la protéine 27 inductible par l’interféron alpha (IFI-27), un petit produit de gène stimulé par l’interféron, associé à la signalisation de l’interféron de type I et aux réponses immunitaires innées. L’expression d’IFI-27 est induite en aval de l’activation de la voie JAK–STAT et est fréquemment utilisée comme lecture moléculaire de l’activité de l’interféron dans des contextes immunitaires et épithéliaux. Au niveau cellulaire, IFI-27 a été associée à des processus mitochondriaux et liés aux membranes, à la susceptibilité à l’apoptose et à la modulation des états antiviraux, avec des effets dépendant du contexte sur la survie cellulaire. Une expression dérégulée d’IFI27 a été rapportée dans des affections inflammatoires, des signatures d’infections virales et de multiples jeux de données transcriptomiques en cancérologie, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques centrées sur des voies de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales IFI-27 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de IFI27 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales IFI-27 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription IFI27, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de IFI-27. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif IFI27 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.