Plásmido CRISPR de Activación (h) IFI-27: sc-416981-ACT

La proteína 27 inducible por interferón alfa (IFI27; IFI-27) es el producto de un gen pequeño estimulado por interferón que se localiza predominantemente en membranas intracelulares, incluidas las mitocondrias, y se induce aguas abajo de la señalización del interferón de tipo I. IFI27 participa en programas de inmunidad innata vinculados a respuestas antivirales, señalización de estrés celular y modulación de la susceptibilidad a la apoptosis, a menudo asociándose con estados transcripcionales ricos en genes estimulados por interferón (ISG). Se ha informado una expresión alterada de IFI27 en distintos contextos inflamatorios y en múltiples firmas transcriptómicas de cáncer, donde puede correlacionarse con activación inmunitaria, remodelación epitelial y vías de interferón asociadas a la enfermedad. Estas propiedades hacen de IFI27 un marcador útil y un nodo funcional para diseccionar fenotipos impulsados por interferón, respuestas al estrés mitocondrial e interacciones inmunidad–tumor en modelos celulares humanos.

IFI-27 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IFI27 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IFI-27 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IFI27 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IFI27, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IFI-27. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IFI27 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IFI-27 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IFI-27 en células tumorales con expresión de IFI27 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.