Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO IDE (m): sc-421021
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- IDE Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique IDE, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IDE Antibody (F-9): sc-393887
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO IDE (m) | sc-421021 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
L’enzyme de dégradation de l’insuline (IDE) est une métalloprotéase au zinc qui assure la protéolyse intracellulaire et extracellulaire de l’insuline et d’autres petits peptides, contribuant ainsi au renouvellement des peptides et à la régulation de la durée des signaux. Dans les tissus murins, l’activité d’IDE interagit avec la signalisation insuline/IGF, le trafic endosomal et les voies de protéostase qui façonnent l’homéostasie métabolique et les réponses au stress. Une expression ou une fonction altérée d’IDE a été associée à une dérégulation de la gestion du glucose et de la clairance des peptides, et l’enzyme est fréquemment étudiée dans des modèles liés aux phénotypes métaboliques et à l’accumulation de peptides associée à la neurodégénérescence. Ainsi, Ide constitue un nœud génétique utile pour analyser comment la dégradation des peptides influence les réseaux de signalisation cellulaire et la biologie des protéines sujettes à l’agrégation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IDE (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ide dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ide, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ide à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IDE.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ide pour l'étude de la signalisation de IDE, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ide essentiels à la fonction de IDE
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ide pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le IDE plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IDE plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ide. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le IDE plasmide HDR (m) et le IDE (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ide pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ide définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.