Plásmido CRISPR de Activación (h) Id3: sc-400944-ACT

ID3 codifica la proteína humana Id3, un regulador transcripcional de tipo hélice–bucle–hélice (HLH) que carece de dominio de unión al ADN y modula la expresión génica al secuestrar proteínas E y otros factores bHLH. Mediante este mecanismo dominante negativo, Id3 influye en el compromiso de linaje, la progresión del ciclo celular y los programas de diferenciación en contextos inmunitarios, vasculares y epiteliales, integrando entradas de señalización como TGF-β/BMP y vías mitogénicas. La actividad alterada de ID3 se ha relacionado con una proliferación y diferenciación desreguladas, con relevancia descrita en estados transcripcionales oncogénicos, el remodelado vascular y la función de las células inmunitarias. Estas características convierten a ID3 en un nodo útil para estudiar el equilibrio de las redes transcripcionales, las decisiones de destino específicas del contexto y la plasticidad fenotípica impulsada por vías de señalización.

Id3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ID3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Id3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ID3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ID3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Id3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ID3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Id3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Id3 en células tumorales con expresión de ID3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.