Id1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400341-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Id1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Id1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Id1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ID1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Id1: sc-133104
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Id1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400341-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Id1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400341-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **ID1** kodiert **Id1**, ein Helix-Loop-Helix-(HLH)-Protein, dem eine basische DNA-Bindungsregion fehlt und das als dominant-negativer Regulator von bHLH-Transkriptionsfaktoren wirkt. Durch die Sequestrierung von E-Proteinen moduliert Id1 Transkriptionsprogramme, die die Zellzyklusprogression, die Linienfestlegung und die Differenzierung steuern, und es wird häufig mit stammzellähnlichen Zuständen und zellulärer Plastizität in Verbindung gebracht. Die ID1-Expression wird nachgeschaltet von mitogenen und entwicklungsbiologischen Signalen reguliert, einschließlich BMP/TGF-β-assoziierter Signalwege, und ist in Netzwerke integriert, die Proliferation und Migration beeinflussen. Eine fehlregulierte ID1-Aktivität wurde in mehreren Krankheitskontexten mit onkogenen Transkriptionsnetzwerken und veränderter Differenzierung assoziiert, was ID1 als Ziel für mechanistische Studien zur Wachstumskontrolle und zu Schicksalsentscheidungen unterstützt.
Id1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ID1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ID1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ID1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ID1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.