Plásmido Doble Nickase (h) ICSBP: sc-400774-NIC

El factor regulador de interferón 8 (IRF8), también conocido como ICSBP, es un factor de transcripción hematopoyético que gobierna el compromiso de linaje y la maduración de las poblaciones de células mieloides y dendríticas. Integra la señalización del interferón y de los receptores tipo Toll al asociarse con factores de la familia ETS/IRF para modular promotores que contienen ISRE/EICE, dando forma a los programas de citocinas, la presentación de antígenos y las funciones efectoras de la inmunidad innata. Las redes transcripcionales dependientes de IRF8 influyen en la polarización de macrófagos, el desarrollo de células dendríticas y la expresión de genes inflamatorios, vinculándolo con vías que controlan las respuestas antimicrobianas y la homeostasis inmunitaria. La actividad desregulada de IRF8 se ha asociado con una mielopoyesis alterada y disfunción inmunitaria, y con frecuencia se estudia en el contexto de la leucemogénesis, los síndromes mielodisplásicos y los trastornos inflamatorios.

ICSBP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IRF8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IRF8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IRF8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IRF8 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.