Plásmido CRISPR de Activación (h) I1PP2A: sc-402988-ACT

ANP32A codifica I1PP2A, una fosfoproteína nuclear ácida rica en leucina que actúa como inhibidor de la proteína fosfatasa 2A (PP2A), modelando la señalización dependiente de fosforilación y los procesos asociados a la cromatina. Al modular la actividad de PP2A, I1PP2A influye en la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN, los programas de transcripción y las redes de señalización adaptativas al estrés. ANP32A se ha vinculado a la regulación de la apoptosis y de las respuestas inmunitarias innatas, y se estudia con frecuencia en contextos en los que un control aberrante de las fosfatasas altera la homeostasis celular. La expresión o función desregulada de ANP32A/I1PP2A se ha asociado con la biología tumoral, mecanismos neurodegenerativos y señalización inflamatoria, lo que respalda su relevancia en modelos de enfermedad centrados en rutas de señalización.

ANP32A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ANP32A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ANP32A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ANP32A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ANP32A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ANP32A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ANP32A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ANP32A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ANP32A en células tumorales con expresión de ANP32A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.