Plásmido Doble Nickase (h) HYPB: sc-402789-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HYPB consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HYPB (h) y el plásmido de doble nickasa HYPB (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SETD2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HYPB | sc-402789-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HYPB | sc-402789-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SETD2 (HYPB) codifica una metiltransferasa de histonas con dominio SET que cataliza la trimetilación de la lisina 36 de la histona H3 (H3K36me3) durante la elongación transcripcional, vinculando el estado de la cromatina con la actividad de la ARN polimerasa II. Esta marca ayuda a coordinar el procesamiento de ARN cotranscripcional, las respuestas al estrés de replicación del ADN y la reparación dirigida por homología, y contribuye al mantenimiento de la integridad del genoma mediante la modulación de la accesibilidad de la cromatina. SETD2 también metila sustratos no histónicos, incluidos la α-tubulina y STAT1, lo que la conecta con la regulación del citoesqueleto y con programas transcripcionales estimulados por interferón. La desregulación o pérdida de H3K36me3 dependiente de SETD2 se asocia con patrones de empalme (splicing) alterados, aumento de las tasas de mutación e inestabilidad epigenética observados en múltiples contextos relevantes para el cáncer, lo que respalda su uso frecuente en estudios mecanísticos de cromatina y de vías de daño del ADN.
HYPB El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SETD2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SETD2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SETD2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SETD2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.