Plasmide CRISPR d'Activation (h) HYAL2: sc-405005-ACT

HYAL2 humain code une hyaluronidase ancrée au glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui participe au remodelage de la matrice extracellulaire en initiant la dépolymérisation de l’hyaluronane (HA) à la surface cellulaire. En générant des fragments intermédiaires d’HA pouvant ensuite être traités par d’autres hyaluronidases, HYAL2 influence l’organisation de la matrice péricellulaire, l’adhérence et la motilité cellulaires, et peut moduler la signalisation médiée par des récepteurs liée à la biologie de l’HA, notamment les voies associées à CD44 et à RHAMM. Des altérations du renouvellement de l’HA et de l’activité de HYAL2 ont été associées à des modifications de l’inflammation et de la fibrose tissulaire, ainsi qu’à des phénotypes du microenvironnement tumoral incluant l’invasion et le remodelage stromal. En conséquence, HYAL2 est fréquemment étudié dans des contextes où la dynamique de la matrice façonne le comportement cellulaire, notamment les processus du développement, les réponses aux lésions et la régulation de la matrice extracellulaire associée au cancer.

HYAL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HYAL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HYAL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HYAL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HYAL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HYAL2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HYAL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HYAL2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HYAL2 dans les cellules tumorales présentant une expression de HYAL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.