HXK III CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403846-ACT

Das humane **HK3** kodiert die Hexokinase III (HXK III), ein glucosephosphorylierendes Enzym, das die ATP-abhängige Umwandlung von Glukose in Glukose-6-phosphat katalysiert und damit Hexose-Substrate auf den intrazellulären Stoffwechsel festlegt. Durch die Bildung von Glukose-6-phosphat trägt HXK III zur Regulation des glykolytischen Flusses bei und unterstützt die Abzweigung in den Pentosephosphatweg zur NADPH-Produktion und zur Aufrechterhaltung der Redox-Homöostase. Die HK3-Expression wird häufig in immunologischen und hämatopoetischen Kontexten untersucht, in denen metabolische Reprogrammierung inflammatorische Signalwege, Differenzierung und Stressantworten prägt. Eine dysregulierte Hexokinase-Aktivität und veränderte HK3-Transkription wurden mit krankheitsrelevanten metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter eine abnorme Glukoseverwertung und Veränderungen in oxidativen Stresswegen.

HXK III Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HK3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HXK III Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HK3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HK3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HXK III-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HK3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HXK III-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HXK III-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HK3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.