Partículas Lentivirales de Activación (m) HXK II: sc-420866-LAC

El gen murino Hk2 codifica la hexoquinasa II (HXK II), una enzima asociada a las mitocondrias que cataliza el primer paso comprometido de la glucólisis al fosforilar la glucosa a glucosa-6-fosfato, vinculando así la captación de glucosa con el flujo glucolítico y con las vías biosintéticas posteriores. La HXK II integra la señalización metabólica con la supervivencia celular al acoplarse a la membrana mitocondrial externa e influir en el uso de ATP, el equilibrio redox y la susceptibilidad a la apoptosis. La actividad de Hk2 se interseca con la señalización de insulina/PI3K–AKT, las respuestas a la hipoxia y las redes de detección de nutrientes que coordinan la glucólisis, la vía de las pentosas fosfato y los aportes anapleróticos al ciclo del TCA. La expresión o localización desregulada de la HXK II se estudia con frecuencia en modelos de reprogramación metabólica, inflamación y fenotipos glucolíticos asociados a tumores, lo que respalda su relevancia en la investigación mecanística orientada a enfermedades.

Las partículas de activación lentiviral HXK II (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Hk2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HXK II (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Hk2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HXK II. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Hk2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.