HXK II Double Nickase Plasmid (h): sc-400611-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HXK II Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HXK II Double-Nickase-Plasmid (h) und HXK II Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HK2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HXK II: sc-374091
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HXK II Double Nickase Plasmid (h) | sc-400611-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HXK II Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400611-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes HK2 kodiert Hexokinase II (HXK II), ein mit den Mitochondrien assoziiertes Enzym, das die ATP-abhängige Phosphorylierung von Glukose zu Glukose-6-phosphat katalysiert und damit Glukose irreversibel der Glykolyse sowie dem Pentosephosphatweg zuführt. Durch die Kopplung an spannungsabhängige Anionenkanäle in der äußeren Mitochondrienmembran trägt HXK II dazu bei, die zelluläre Bioenergetik, die Redoxhomöostase und den metabolischen Fluss unter wechselnden Nährstoff- und Sauerstoffbedingungen zu koordinieren. HK2 wird häufig im Kontext der metabolischen Reprogrammierung untersucht, bei der eine veränderte Kontrolle der Glykolyse Proliferation, Stressantworten und die Anpassung an Hypoxie beeinflusst. Eine fehlregulierte Aktivität und Expression von HK2/HXK II wurde in mehreren krankheitsrelevanten Modellen beschrieben, darunter der Tumorstoffwechsel und insulinresistente Zustände, wodurch es ein häufiges Ziel für mechanistische Studien zur Glukoseverwertung ist.
HXK II Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HK2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HK2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HK2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HK2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.