Plásmido CRISPR de Activación (h) HXK II: sc-400611-ACT

El gen humano **HK2** codifica la **hexoquinasa II (HXK II)**, una enzima asociada a la mitocondria que cataliza la fosforilación de la glucosa a **glucosa-6-fosfato** dependiente de ATP, comprometiendo la glucosa con la glucólisis y vías biosintéticas relacionadas. Al acoplar el flujo glucolítico al metabolismo mitocondrial, la HXK II influye en la homeostasis energética celular, el equilibrio redox y la disponibilidad de precursores anabólicos que alimentan la vía de las pentosas fosfato y la síntesis de nucleótidos y lípidos. La expresión elevada de HK2 y una glucólisis reorganizada se observan con frecuencia en estados proliferativos y adaptados al estrés, lo que vincula a la HXK II con la reprogramación metabólica en biología del cáncer, la activación de células inmunitarias y la señalización sensible a la hipoxia. La actividad alterada de HK2 también se ha implicado en tejidos sensibles a la insulina y en mecanismos de enfermedades metabólicas, por lo que se utiliza ampliamente como un punto clave para estudiar la utilización de la glucosa y la comunicación cruzada mitocondria–metabolismo.

HXK II El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HK2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HXK II El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HK2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HXK II. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HK2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HXK II en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HXK II en células tumorales con expresión de HK2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.