Plásmido CRISPR de Activación (m) HuR/ELAV1: sc-421003-ACT

Elavl1 codifica HuR/ELAV1, una proteína de unión a ARN que reconoce elementos ricos en AU en las UTR 3′ y modula la estabilidad, localización y traducción del ARNm. En células de ratón, HuR coordina programas de regulación génica postranscripcional vinculados al control del ciclo celular, las respuestas al estrés, la señalización inmunitaria innata y la diferenciación, al moldear la vida media de transcritos de citocinas, factores de crecimiento y genes asociados a la supervivencia. La actividad de HuR se regula de manera dinámica mediante fosforilación y el transporte núcleo‑citoplásmico, integrando señales de MAPK, PKC y otras rutas para ajustar con precisión los resultados de la expresión génica. En la literatura, los regulones de ARN dependientes de HuR desregulados se han asociado con inflamación, transformación oncogénica y remodelación tisular, lo que convierte a Elavl1 en un nodo útil para estudios mecanísticos del metabolismo del ARN y el entrecruzamiento de vías de señalización.

HuR/ELAV1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Elavl1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HuR/ELAV1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Elavl1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Elavl1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HuR/ELAV1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Elavl1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HuR/ELAV1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HuR/ELAV1 en células tumorales con expresión de Elavl1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.