Plásmido CRISPR de Activación (h) Huntingtin: sc-401441-ACT

HTT codifica la huntingtina, una gran proteína citoplasmática y nuclear que mantiene la homeostasis neuronal mediante su participación en el tráfico vesicular, la endocitosis, la autofagia y el transporte dependiente de microtúbulos. La huntingtina también influye en la regulación transcripcional y la función sináptica al coordinar redes de interacciones proteína–proteína y actuar como proteína andamiaje de complejos de señalización. En células humanas, HTT contribuye a las vías de respuesta al estrés y de proteostasis, conectando la función mitocondrial y la eliminación selectiva de carga con programas celulares de supervivencia. La desregulación de la biología de la huntingtina, incluidos cambios en la proteostasis y el control transcripcional, se utiliza ampliamente como modelo para estudiar alteraciones de vías asociadas a la neurodegeneración.

Huntingtin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HTT sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Huntingtin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HTT en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HTT, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Huntingtin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HTT y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Huntingtin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Huntingtin en células tumorales con expresión de HTT silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.