HUNK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405786

Descripción general

HUNK (hormonally upregulated Neu-associated kinase) codifica una proteína quinasa de serina/treonina de la familia de quinasas relacionadas con AMPK que integra la señalización sensible a factores de crecimiento y hormonas con el comportamiento de las células epiteliales. HUNK se ha vinculado con la regulación de programas de supervivencia celular, el mantenimiento de la polaridad y procesos asociados a vesículas y al tráfico intracelular que influyen en la adhesión y la migración, con conexiones descritas con las salidas de las redes PI3K–AKT y MAPK en contextos de estrés y proliferación. Se ha observado una expresión o actividad desregulada de HUNK en múltiples modelos relacionados con el cáncer, donde se estudia por sus funciones en la adaptación de las células tumorales, rasgos metastásicos y fenotipos de respuesta a terapias. Además, la biología de HUNK es relevante para el diálogo cruzado de señalización entre quinasas en tejidos mamarios y neurales, lo que respalda estudios mecanísticos sobre el reconfigurado de vías en estados celulares relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HUNK (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HUNK en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HUNK junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HUNK tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HUNK.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HUNK para la investigación de la señalización de HUNK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HUNK críticos para la función de HUNK
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HUNK para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HUNK CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HUNK CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HUNK. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HUNK (h) y el plásmido HDR HUNK (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HUNK para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HUNK definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.