Plásmido CRISPR de Activación (h) HTF9C: sc-407594-ACT

El TRMT2A humano codifica HTF9C, una metiltransferasa de tRNA implicada en la modificación posranscripcional del ARN mediante la formación de 5‑metiluridina en posiciones definidas del tRNA. Al modular la estabilidad del tRNA y la fidelidad del descifrado, TRMT2A favorece una traducción eficiente y la proteostasis, procesos que influyen en la progresión del ciclo celular y la adaptación al estrés. La alteración de las redes de modificación del tRNA se ha asociado con cambios en el control translacional y en los programas de mantenimiento del genoma, lo que hace que TRMT2A/HTF9C sea relevante para estudios sobre señalización proliferativa y homeostasis celular. Los cambios de expresión y de función en enzimas modificadoras de tRNA se exploran con frecuencia en el contexto de la biología del cáncer y la neurobiología como factores que contribuyen a la desregulación de la expresión génica a nivel translacional.

HTF9C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRMT2A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HTF9C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRMT2A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRMT2A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HTF9C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRMT2A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HTF9C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HTF9C en células tumorales con expresión de TRMT2A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.