Partículas Lentivirales de Activación (h) HSPA8/HSC70: sc-418508-LAC

HSPA8 (HSC70) codifica una chaperona de la familia HSP70 expresada de manera constitutiva que sostiene la proteostasis al regular el plegamiento y repliegamiento de proteínas dependiente de ATP y la prevención de la agregación. HSC70 coordina la autofagia mediada por chaperonas mediante el direccionamiento lisosomal de sustratos con motivo KFERQ, participa en la endocitosis mediada por clatrina y ayuda a la maduración y el tráfico de proteínas de señalización. A través de interacciones con cochaperonas y el sistema ubiquitina–proteasoma, influye en las respuestas al estrés, la dinámica del citoesqueleto y el control de calidad de los orgánulos. La desregulación de las redes de chaperonas vinculadas a HSPA8 se ha asociado con la neurodegeneración, los programas de supervivencia de células cancerosas y las interacciones huésped–patógeno, lo que la convierte en un nodo útil para estudios funcionales centrados en vías.

Las partículas de activación lentiviral HSPA8/HSC70 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de HSPA8 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HSPA8/HSC70 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción HSPA8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HSPA8/HSC70. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo HSPA8 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.