Partículas Lentivirales de Activación (h) HSPA5/BiP/GRP78: sc-400073-LAC

HSPA5 codifica BiP/GRP78, una chaperona de la familia HSP70 del retículo endoplásmico (RE) que se une a polipéptidos nacientes y regula el control de calidad del plegamiento proteico. Como sensor central de la homeostasis del RE, HSPA5 modula la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) mediante interacciones que influyen en la señalización de PERK, IRE1 y ATF6, conectando la proteostasis con la degradación asociada al RE, el manejo del calcio y las respuestas al estrés oxidativo. La actividad desregulada de HSPA5 se estudia con frecuencia en contextos de estrés crónico del RE, como la adaptación de células cancerosas, las enfermedades metabólicas y la neurodegeneración, donde la proteostasis y la señalización de la UPR alteradas contribuyen a la supervivencia celular y a vías inflamatorias. Dado que BiP/GRP78 afecta la secreción y la maduración de proteínas de membrana, también es relevante para estudios sobre el procesamiento de proteínas virales y las interacciones huésped–patógeno.

Las partículas de activación lentiviral HSPA5/BiP/GRP78 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de HSPA5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HSPA5/BiP/GRP78 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción HSPA5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HSPA5/BiP/GRP78. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo HSPA5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.