Plásmido Doble Nickase (h) HSPA5/BiP/GRP78: sc-400073-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HSPA5/BiP/GRP78 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HSPA5/BiP/GRP78 (h) y el plásmido de doble nickasa HSPA5/BiP/GRP78 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HSPA5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HSPA5/BiP/GRP78 Anticuerpo (76-E6): sc-13539
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HSPA5/BiP/GRP78 | sc-400073-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HSPA5/BiP/GRP78 | sc-400073-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA5 codifica la chaperona residente del RE BiP/GRP78 (HSPA5), un regulador central de la proteostasis que se une a polipéptidos nacientes, previene la agregación y favorece el plegamiento y el ensamblaje de proteínas secretoras y de membrana. Como sensor y efector clave de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), HSPA5 modula la señalización de estrés del RE a través de las vías PERK–EIF2α, IRE1–XBP1 y ATF6, influyendo en la traducción, el control de calidad y los programas transcripcionales adaptativos. HSPA5 también participa en la degradación asociada al RE (ERAD) y en la homeostasis del calcio, acoplando la capacidad de plegamiento a los estados redox y metabólicos. La actividad desregulada de HSPA5 se asocia con enfermedades caracterizadas por estrés proteotóxico crónico, incluidas la biología tumoral, la neurodegeneración, la disfunción metabólica y los estados inflamatorios, lo que la convierte en un nodo clave para estudios mecanísticos de adaptación al estrés.
HSPA5/BiP/GRP78 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HSPA5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HSPA5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HSPA5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HSPA5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.