Plásmido CRISPR de Activación (h) HSPA1L: sc-400479-ACT

HSPA1L codifica un miembro de la familia HSP70 de chaperonas moleculares dependientes de ATP que sostiene la proteostasis al promover el plegamiento de proteínas nacientes, prevenir la agregación y facilitar el replegamiento de sustratos desnaturalizados por el estrés. HSPA1L participa en la respuesta celular al choque térmico y se integra con redes de cochaperonas para regular el control de calidad proteica, incluida la estabilización de proteínas de señalización y la modulación de programas transcripcionales adaptativos al estrés. A través de estas funciones, HSPA1L puede influir en vías vinculadas al estrés del retículo endoplásmico, el recambio mediado por el proteasoma y las decisiones de supervivencia celular durante el estrés proteotóxico. La alteración de la actividad de las chaperonas y de la señalización del choque térmico se asocia con fenotipos relevantes para enfermedades en biología del cáncer, neurodegeneración y contextos de estrés inflamatorio, lo que convierte a HSPA1L en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la resiliencia al estrés y el mantenimiento del proteoma.

HSPA1L El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HSPA1L sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HSPA1L El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HSPA1L en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HSPA1L, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HSPA1L. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HSPA1L y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HSPA1L en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HSPA1L en células tumorales con expresión de HSPA1L silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.