Plasmide Double Nickase (h) HSPA14: sc-407280-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HSPA14 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HSPA14 Double Nickase (h) et le plasmide HSPA14 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HSPA14. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HSPA14 Antibody (G-9): sc-398208
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HSPA14 | sc-407280-NIC | 20 µg | $410.00 |
HSPA14 code un membre de la famille HSP70 qui agit comme chaperon moléculaire dépendant de l’ATP, soutenant le repliement des polypeptides naissants, le contrôle qualité des protéines et le maintien de la protéostasie en conditions basales comme en conditions de stress. L’activité de HSPA14 s’inscrit à l’interface des réponses au choc thermique et des réseaux de co-chaperons afin de réguler le repliement associé à la traduction et de limiter l’accumulation de protéines mal repliées. Par ces fonctions, elle influence la résilience cellulaire au stress, la signalisation liée au stress protéotoxique et la récupération après des agressions environnementales ou métaboliques perturbant l’homéostasie protéique. La dérégulation de la capacité de chaperonnage, y compris celle de composants de la famille HSP70 tels que HSPA14, est fréquemment étudiée dans des contextes de neurodégénérescence, d’adaptation des cellules cancéreuses au stress et de troubles caractérisés par une altération du maintien du protéome.
HSPA14 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSPA14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSPA14. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSPA14. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSPA14.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.