Plasmide CRISPR/Cas9 KO HSPA14 (h): sc-407280

Présentation

HSPA14 (protéine 1 de type Hsp70) est un membre de la famille des chaperonnes HSP70 qui soutient le contrôle qualité des protéines en stabilisant les polypeptides naissants, en favorisant un repliement correct et en limitant l’agrégation lors du stress cellulaire. Elle participe à des réseaux de protéostasie liés à la traduction, au chaperonnage associé aux ribosomes et à des voies sensibles au stress qui coordonnent la récupération après un choc thermique et d’autres agressions protéotoxiques. En modulant l’équilibre entre la capacité de repliement et la prise en charge des protéines mal repliées, HSPA14 contribue à façonner l’homéostasie cellulaire dans des contextes tels que le stress oxydatif, le dialogue de protéostasie entre le RE et le cytosol, et la signalisation adaptative au stress. L’activité chaperonne dérégulée et le déséquilibre de la protéostasie sont couramment étudiés en biologie du cancer, dans les maladies neurodégénératives et dans des modèles de stress inflammatoire, ce qui fait de HSPA14 une cible utile pour des investigations mécanistiques de la résistance au stress et de l’homéostasie protéique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HSPA14 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HSPA14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HSPA14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HSPA14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HSPA14.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HSPA14 pour l'étude de la signalisation de HSPA14, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HSPA14 essentiels à la fonction de HSPA14
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HSPA14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HSPA14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HSPA14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HSPA14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HSPA14 plasmide HDR (h) et le HSPA14 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HSPA14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HSPA14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.