Plásmido Doble Nickase (h) HSP90B1/HSP90 beta: sc-400214-NIC

HSP90AB1 codifica la HSP90 beta citosólica (HSP90B1/HSP90 beta), una chaperona molecular dependiente de ATP que estabiliza y favorece la maduración de una amplia gama de proteínas cliente implicadas en la transducción de señales, el control del ciclo celular y las respuestas al estrés. Como componente central de la red de proteostasis, HSP90 beta coopera con cochaperonas y con el sistema ubiquitina–proteasoma para regular el plegamiento proteico, el control de calidad y la degradación, influyendo en vías como MAPK/ERK, PI3K–AKT y las respuestas al daño del ADN. La alteración de la función de HSP90 beta puede remodelar la estabilidad del proteoma y el manejo del estrés proteotóxico, con relevancia para estudios sobre dependencias de señalización oncogénica, el mal plegamiento proteico asociado a neurodegeneración y fenotipos de estrés inflamatorio o metabólico. Dado que muchas quinasas y reguladores transcripcionales dependen de la actividad de HSP90, HSP90AB1 se utiliza con frecuencia para investigar la robustez de la señalización amortiguada por chaperonas y la adaptación celular bajo estrés.

HSP90B1/HSP90 beta El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HSP90AB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HSP90AB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HSP90AB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HSP90AB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.